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Obiettivi: La N-glicosilazione (N-glycosylation) è una modificazione dei glicani altamente conservata che svolge ruoli cruciali in vari processi fisiologici, tra cui il ripiegamento delle proteine, il traffico e la trasduzione del segnale. Il deltacoronavirus suino (PDCoV) rappresenta una minaccia emergente per il settore globale dei suini. La proteina spike del PDCoV presenta un elevato livello di N-glicosilazione; tuttavia, il suo ruolo nell’infezione virale rimane poco compreso. In questo studio, abbiamo applicato un sistema reporter di ingresso basato su lentivirus per studiare il ruolo della N-glicosilazione sulla proteina virale del picco durante la fase di ingresso del PDCoV. I nostri risultati dimostrano che la N-glicosilazione nelle posizioni 652 e 661 della proteina virale del picco riduce significativamente l’infettività del virus pseudotipato PDCoV. Nel complesso, i nostri risultati svelano una nuova funzione della N-glicosilazione nell’infezione da PDCoV, evidenziandone il potenziale per facilitare lo sviluppo di strategie antivirali.
Materiali e Metodi: sono stati impiegati diversi materiali e metodi per analizzare le varianti della proteina spike del virus della diarrea epidemica suina (PDCoV). Le linee cellulari PK15, LLC-PK e HEK293T sono state coltivate in terreno di coltura specifico integrato con siero bovino fetale. Il gene PDCoV S è stato inserito in un vettore specifico. Le varianti N652Q e N661Q della proteina spike sono state generate attraverso mutagenesi sito-diretta utilizzando la tecnica della PCR. Un anticorpo specifico contro la proteina S è stato fornito da un collaboratore esterno. Successivamente, le cellule HEK293T sono state trasferite con plasmidi contenenti le varianti della proteina S .Per valutare l'ingresso virale delle varianti, è stato utilizzato un virus pseudotipato PDCoV generato nelle cellule HEK293T.L'ingresso virale è stato analizzato tramite il test Promega luciferasi 24 ore dopo l'infezione. Questi metodi sono stati utilizzati per valutare le caratteristiche delle varianti della proteina spike del PDCoV e il loro impatto sull'ingresso virale nelle cellule bersaglio.
Risultati: ipotizziamo che i glicani legati all'N nelle posizioni 652 e 661 regolino l'infettività virale probabilmente modulando la loro attività di fusione. La corretta scissione della proteina S è cruciale per la replicazione del coronavirus; ad esempio, la tripsina svolge un ruolo importante nell’infezione da PDCoV. Il nostro recente lavoro ha indicato che la tripsina promuove la replicazione del PDCoV migliorando la loro diffusione da cellula a cellula mediata dalla proteina S piuttosto che l’ingresso (13). Il potenziale impatto del glicano sulla scissione della proteina S richiede ulteriori indagini. Inoltre, è importante convalidare questi risultati in futuro sui virus vivi...
Wang Hai-Ming, Qiao Yang-Yang, Liu Yong-Gang, Cai Bing-Yan, Yang Yue-Lin, Lu Hui, Tang Yan-Dong /The N-glycosylation at positions 652 and 661 of viral spike protein negatively modulates porcine deltacoronavirus entry/Frontiers in Veterinary Science:11,2024 https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fvets.2024.1430113/DOI=10.3389/fvets.2024.1430113
