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Diagnosi di Laboratorio: Rotavirus

Quali metodi diagnostici di laboratorio posso utilizzare per diagnosticare i rotavirus?.. Quale dovrei scegliere in base alla situazione?... Come interpreto i risultati?...

Esistono 3 gruppi principali di Rotavirus che causano la diarrea nei suini: Rotavirus A, Rotavirus B e Rotavirus C. Ogni gruppo di virus è diverso dagli altri e richiede test specifici progettati per loro. La diarrea nei suini spesso comporta infezioni con più gruppi di rotavirus contemporaneamente.

Test disponibili:

Patologia macroscopica

  • Valuta la presenza di assottigliamento della parete dell'intestino tenue che può suggerire la presenza di malattia.
  • Localizzazione delle lesioni: digiuno e ileo.
  • Pro:
    • Risultati rapidi ed economici
    • Applicabile a tutti e tre i gruppi di rotavirus
  • Contro:
    • Non diagnostici: lesioni simili possono essere riscontrate con altre malattie, in particolare infezioni da coronavirus (gastroenterite trasmissibile, diarrea epidemica suina e delta coronavirus suino)
    • Richiede tessuti freschi (<15 minuti) poiché la decomposizione modifica drasticamente l'aspetto dell'intestino tenue
    • Non distingue tra diversi gruppi di rotavirus

Atrofia dei villi causata dal rotavirus. Foto delle malattie dei suini di Perle Zhitnitskiy, DVM, MSpVM. Fonte: Dr. Carlos Pijoan https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
Atrofia dei villi causata dal rotavirus. Foto delle malattie dei suini di Perle Zhitnitskiy, DVM, MSpVM. Fonte: Dr. Carlos Pijoan https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
Istopatologia

  • Valuta la presenza di lesioni tissutali (atrofia dei villi dell'intestino tenue) che possono fortemente suggerire la presenza di malattia.
  • Tipi di campioni: tessuto del digiuno e dell'ileo.
  • Pro:
    • Conferma l'atrofia dei villi che suggerisce un'enterite virale
  • Contro:
    • È necessario fissare i tessuti intestinali con formalina in meno di 15 minuti dalla morte dell'animale. Il tessuto intestinale si decompone rapidamente.

Immunoistochimica (IHC)

  • Rileva la presenza dell'antigene virale.
  • Tipi di campioni: tessuto del digiuno e dell'ileo.
  • Pro:
    • Diagnosi definitiva: può confermare la presenza del virus con lesioni associate.
  • Contro:
    • Attualmente disponibile solo per Rotavirus A e Rotavirus C (non disponibile per Rotavirus B)

Polymerase chain reaction (PCR)

  • Rileva la presenza di una sequenza specifica di acido nucleico virale (RNA).
  • Tipi di campioni: tessuti intestinali del digiuno e dell'ileo, tamponi fecali, feci.
  • Pro:
    • La PCR multiplex è in grado di rilevare diversi gruppi di rotavirus, tra cui Rotavirus A, Rotavirus B e Rotavirus C
    • Alta sensibilità.
    • Quantificazione tramite PCR
    • Costo moderato
      • I campioni di feci o tessuti possono spesso essere raggruppati per ridurre i costi e minimizzare la perdita di sensibilità (soprattutto per quanto riguarda la rilevanza clinica).
  • Contro:
    • Alta sensibilità – può confermare la presenza del virus ma non della malattia (alta prevalenza del virus nell’ambiente)

Isolamento del virus

  • Isola il virus vivo.
  • Tipi di campioni: tessuti intestinali del digiuno e dell'ileo, tamponi fecali, feci.
  • Pro:
    • Isolamento del virus da utilizzare nello sviluppo di vaccini (vaccini stabulogeni)
  • Contro:
    • Caro
    • Risultati lenti
    • Attualmente disponibile solo per il Rotavirus A e non per il Rotavirus B o il Rotavirus C
    • Spesso difficile da coltivare (molti falsi negativi)
    • La manipolazione dei campioni dal campo al laboratorio può influenzare la sopravvivenza del virus

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

  • Rileva la presenza di anticorpi.
  • Tipi di campioni: siero.
  • Pro:
    • Gli animali rimangono positivi per diverse settimane
    • Può identificare allevamenti negativi.
  • Contro:
    • L'elevata prevalenza del virus nell'ambiente determina un'esposizione comune in molti/la maggior parte dei suini
    • Richiede un test specifico per ciascun gruppo di rotavirus
    • Non esiste protezione crociata tra i diversi gruppi di rotavirus.

Tabella 1. Riepilogo dei test applicabili rispetto ai diversi gruppi di rotavirus.

Rotavirus A Rotavirus B Rotavirus C Ti permette di distinguere tra i gruppi?
Patologia macroscopica No
Istopatologia No
Immunoistochimica (IHC) No
Reazione a catena della polimerasi (PCR)
Isolamento del virus No No No
Saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) No No No

Interpretazione dei risultati:

Patologia macroscopica

  • Positivo: Conferma preliminare della presenza di assottigliamento intestinale.
  • Negativo: i casi precoci o lievi potrebbero non manifestare lesioni intestinali estese.

Istopatologia

  • Positivo: conferma della malattia, ma non della causa della malattia.
  • Negativo: il risultato negativo o le lesioni non vengono rilevate se viene testato il campione non corretto o se viene eseguito troppo tempo dopo l'infezione.

IHC

  • Positivo: il virus è presente nel sito della lesione.
  • Negativo: negativo oppure il virus non viene rilevato se il test viene eseguito molto tempo dopo l'infezione o se la concentrazione del virus è troppo bassa (presente solo per un breve periodo di tempo).

PCR

  • Positivo: Conferma della presenza dei diversi gruppi di rotavirus (A, B e C).
  • Negativo: negativo, il virus non viene rilevato se il test viene eseguito molto tempo dopo l'infezione o a causa di una selezione o manipolazione errata del campione.

Isolamento del virus

  • Positivo: conferma della presenza del virus ma non della malattia.
  • Negativo: negativo, il virus non viene rilevato se il test viene eseguito molto tempo dopo l'infezione o semplicemente non può crescere a causa di altra contaminazione o cattiva manipolazione (presente ma molto difficile da coltivare). Non rileva Rotavirus B o Rotavirus C.

ELISA

  • Positivo: precedente esposizione (> 2-4 settimane) al vaccino o al virus di campo. Nessuna associazione tra positività e malattia.
    Negativo:
    • Negativo al vaccino o al virus di campo
    • Infezione troppo recente per essere rilevata

Scenari:

Suinetti neonati con diarrea (acuta o cronica)

  • Raccogliere campioni fecali da 10 o più suini non trattati, con diarrea ed inviarli per il test PCR per Rotavirus A, Rotavirus B e Rotavirus C in pool di 5.
  • Necroscopia di 1-3 suini recentemente morti o suini sottoposti a eutanasia con diarrea. Valutare macroscopicamente il digiuno e l'ileo per l'assottigliamento della parete intestinale. Raccogliere campioni e fissarli in formalina per istopatologia e IHC.

Suinetti appena svezzati con diarrea (acuta o cronica)

  • Raccogliere campioni fecali da 10 o più suini non trattati con diarrea e inviarli per il test PCR per Rotavirus A, Rotavirus B e Rotavirus C in pool di 5.
  • Necroscopia di 1-3 suini recentemente morti o suini sottoposti a eutanasia con diarrea. Valutare macroscopicamente il digiuno e l'ileo per l'assottigliamento della parete intestinale. Raccogliere campioni e fissarli in formalina per istopatologia e IHC.

Consultare la "Guida alle Malattie" per ulteriori informazioni

Infezione da rotavirusIl rotavirus si presenta clinicamente come una diarrea dell'intestino piccolo di suinetti lattanti, oppure delle prime settimane dopo lo svezzamento.

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