Diagnosi di laboratorio: Malattia di Aujeszky (Pseudorabbia - PRV)

Test disponibili:

Immunoistochimica (IHC)

• Rileva la presenza di antigeni virali.
• Tipi di campione: tessuti.
• Pro:
  • Rileva il virus nel sito della lesione (buona prova del nesso di causalità).
  • Qualsiasi risultato positivo è considerato significativo.
• Contro:
  • È necessario inviare il campione di tessuto corretto.
  • Richiede una quantità significativamente maggiore di virus rispetto alla PCR.
  • Valuta solo una piccola quantità di tessuto.
  • È probabile che le infezioni latenti non vengano rilevate a meno che non siano inclusi il nervo trigemino e/o le tonsille.

Polymerase chain reaction (PCR)

• Rileva la presenza di specifiche sequenze di acido nucleico virale (DNA).
• Tipi di campioni: tessuti.
• Pro:
  • Alta sensibilità.
  • La quantificazione della PCR è associata alla presenza di lesioni.
  • Costo moderato:
    • I campioni di tessuto possono spesso essere combinati per ridurre i costi e minimizzare la perdita di sensibilità (soprattutto per quanto riguarda la rilevanza clinica).
  • Alcuni test PCR possono distinguere tra virus vaccinali deleti genici e infezioni da virus di campo.
• Contro:
  • Richiede campioni di tessuto (post mortem) per ottenere i migliori risultati.
  • È probabile che le infezioni latenti non vengano rilevate a meno che non siano inclusi il nervo trigemino e/o le tonsille.

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

• Cerca la presenza di anticorpi.
• Tipi di campioni: siero.
• Pro:
  • Gli animali rimangono positivi per diverse settimane.
  • Può essere utilizzato in casi cronici.
  • Può essere utilizzato per differenziare l'esposizione al virus di campo dal vaccino con geni deleti (vedi Tabella 1).
  • Qualsiasi risultato positivo per il virus di campo è considerato significativo.
  • Ci vogliono solo 5-7 giorni perché gli animali diventino sieropositivi dopo l'esposizione al virus di campo.

La tabella 1 aiuta a dimostrare le capacità DIVA (differenziazione tra animali infetti da animali vaccinati) di alcuni test ELISA quando si utilizza un vaccino con geni deleti.

• Contro:
  • E' necessario far coincidere il test adeguato con la delezione dei geni appropriata nel vaccino.
  • Ci vogliono 10-14 giorni perché gli animali diventino sieropositivi dopo la vaccinazione.

Virus neutralization (VN)

• Rileva la presenza di anticorpi.
• Tipi di campioni: siero.
• Pro:
  • Gli animali rimangono positivi per diverse settimane.
  • Può essere utilizzato in casi cronici.
  • Sensibilità maggiore rispetto a ELISA (può rilevare una minore concentrazione di anticorpi).
• Contro:
  • Non è fattibile per un gran numero di campioni.
  • Ci vogliono 12 giorni perché gli animali diventino sieropositivi..
  • Non distingue tra vaccinazione e infezione da virus di campo.
  • L'affidabilità dipende fortemente dall'abilità dei tecnici.
  • La reattività dipende dall'isolato del virus utilizzato.

Interpretazione dei risultati:

IHC

• Positivo: Il virus è presente nel sito della lesione.
• Negativo: Negativo o infezione troppo vecchia per rilevare il virus.

PCR

• Positivo: Il virus è presente. La recente vaccinazione con un virus vivo modificato può risultare positiva alla PCR.
• Negativo: Negativo o il virus non viene rilevato se il test viene eseguito molto tempo dopo l'infezione.

ELISA (target gene deleted)

• Positivo: Anticorpi materni o precedente esposizione (> 5-7 giorni) al virus di campo.
• Negativo: Negativo o infezione troppo recente per essere rilevata.

VN

• Positivo: Esposizione precedente (> 5-14 giorni) al vaccino o al virus di campo.
• Negativo:
  • Negativo al vaccino o al virus di campo.
  • Infezione troppo precoce per essere rilevata (<5-7 giorni per il virus di campo o <10-14 giorni per il vaccino).

Scenari

Allevamento di scrofe con aborti

• Raccogliere 6-8 feti per raggruppare i campioni in pool per la PCR.
• Scrofe/scrofette abortite: raccogliere il siero delle scrofe/scrofette abortite di recente per la PCR. Possono essere mescolati in gruppi di 5.
  • I test ELISA dei singoli campioni possono essere eseguiti se > 7 giorni dopo l'aborto.
  • Negli allevamenti non vaccinati contro la malattia di Aujeszky, è preferibile eseguire la VN invece dell'ELISA a causa della maggiore sensibilità diagnostica del test.

Selezione di scrofette da rimonta da allevamenti vaccinati con animali noti positivi

• Raccogliere campioni di sangue da scrofette da rimonta al 100% e analizzarli individualmente mediante ELISA e VN.
  • Mantenere solo gli animali positivi a VN e negativi a ELISA (vedi Tabella 1 sopra)

Selezione di scrofette da rimonta da allevamenti vaccinati senza positività nota

• Raccogliere campioni di sangue da almeno 30 scrofette da rimonta selezionate casualmente e testarli individualmente con ELISA e VN.
  • Se tutti i campioni testati sono positivi per VN e negativi per ELISA (vedere la tabella 1 sopra), è possibile tenere tutti gli animali da rimonta.
  • Se un campione è negativo per VN, il 100% delle scrofette rimanenti deve essere analizzato e devono essere mantenute solo le scrofette vaccinate (VN = positivo).
  • Se una delle scrofette è positiva all'ELISA, rivalutare il valore di tenere qualsiasi animale nel gruppo, poiché il risultato suggerisce che l'allevamento di origine è ora positivo per la Malattia di Aujeszky.