Uso delle lingue per monitorare il virus della PRRS

Il monitoraggio della presenza del virus della PRRS nelle scrofaie viene utilizzato per classificare lo status dell'allevamento. Il sistema classico di campionamento e classificazione più comune si basa su quello sviluppato da Holtkamp, et al (2011) con prelievo di sangue una volta al mese per diversi mesi consecutivi. Secondo questo protocollo, viene considerato un allevamento:

• Indenne quando i riproduttori sono sieronegativi all'ELISA
• Positivo stabile quando durante 90 giorni non sono stati rilevati suinetti viremici con la tecnica della PCR in suinetti allo svezzamento.
• Positivo instabile quando è stata rilevata la presenza del virus in qualsiasi tessuto e senza raggiungere il minimo di 90 giorni di risultati negativi alla PCR per passare ad essere considerato positivo stabile.

Parallelamente, il monitoraggio può essere utilizzato per valutare l'efficacia delle misure di controllo introdotte dopo un episodio riproduttivo. In questo caso, l'obiettivo iniziale è quello di raggiungere la stabilità alla nascita valutata come assenza di virus in qualsiasi tessuto di suinetti neonati. Il secondo obiettivo è quello di raggiungere la stabilità allo svezzamento e infine, se c'è una fase di transizione nell'allevamento da monitorare, l'assenza di virus nel campionamento dei suinetti alla fine dello svezzamento.

Nuovi tipi di campionamento per il monitoraggio della PRRS

Dopo alcuni anni di uso esclusivo del sangue come tipo di campione nel monitoraggio della PRRS, si stanno sviluppando nuovi sistemi di campionamento delle dimensioni di popolazioni più grandi come i fluidi orali con le corde, ampiamente usato nei suini in svezzamento e nell'ingrasso. Più recentemente, sono state studiate nuove tecniche per la rilevazione del virus della PRRS a partire da campioni aggregati di fluidi testicolari e delle code raccolte durante la manipolazioni dei suinetti ( castrazione e taglio code) con l'ottenimento di buoni risultati, Vilalta et al (2018). I risultati pubblicati sono migliori nei fluidi di manipolazione dei suinetti provenienti dai testicoli rispetto a quelli nelle code. Grazie all'utilizzo dei fluidi di manipolazione dei suinetti (castrazione) è possibile campionare più animali e più frequentemente, il che è molto utile nella rilevazione del virus della PRRS quando la percentuale di animali portatori alla nascita è bassa. Quando la percentuale di castrazione dei suinetti è bassa, l'applicazione pratica di questa tecnica non è fattibile. A parte ciò, le restrizioni sul taglio delle code applicato in maniera routinaria che impongono le normative europee sul benessere degli animali, limitano anche l'uso del fluido del taglio delle code come campione di scelta.

Sulla base di queste linee guida, obiettivi e condizioni, il team di Grup de Sanejament Porcí di Lleida in Spagna ha sviluppato un progetto per valutare una nuova tecnica di monitoraggio basata sulla raccolta di campioni aggregati di parti di carcasse di suinetti morti, conservati in condizioni di congelamento ed inviati al laboratorio con una certa frequenza. La raccolta e l'analisi di questo tipo di campione aggregato e continuo, ci consente di determinare il momento a partire dal quale non viene rilevata la presenza del virus nei tessuti delle carcasse dei suini morti.

Dopo i primi risultati si afferma che la raccolta di pezzi di lingua dei suinetti nati morti è un buon sistema per determinare se vi è la presenza del virus nei suinetti alla nascita.

Porzioni di lingua da cadaveri come campione diagnostico

Il sistema si basa sulla raccolta di pezzi di lingua di almeno 2 cm, conservati in sacchetti o contenitori nel congelatore e sull'invio con la frequenza desiderata (banda dei parti o mensile). Questo sistema presenta buoni risultati e molti vantaggi. La lingua è stata scelta perché è un campione generalmente più pulito della coda, che fornisce una quantità adeguata di fluido e dove c'è anche la presenza di altri elementi come la saliva e il liquido amniotico nel caso dei nati morti (foto 1). Inoltre, non richiede una formazione tecnica specifica e gli stessi operatori d'allevamento possono essere responsabili del prelievo dei campioni.

Nel caso delle fasi di lattazione, svezzamento o ingrasso, viene utilizzato lo stesso sistema di campionamento, una parte delle lingue ottenute dai morti che si verificano in queste fasi durante il periodo da studiare. In questi casi, i campioni vengono conservati separatamente in tre contenitori, a seconda della fase in cui si è verificato il prelievo: inizio, metà e fine dello svezzamento o ingrasso.

Questo campione aggregato viene conservato in sacchetti o contenitori in condizioni di congelamento fino a quando non viene inviato al laboratorio diagnostico. Lì viene elaborato per ottenere il fluido estratto dalle tracce di liquido presente nelle lingue.

Con questo fluido viene eseguita una PCR per determinare la presenza o l'assenza di virus. È stato anche possibile il sequenziamento di diverse porzioni del genoma virale con la tecnica del sequenziamento di Sanger.

I requisiti di base per questo sistema di campionamento sono: presenza del congelatore in allevamento e sufficienti quantità di suini da campionare durante il periodo di tempo da studiare.

Questo sistema di campionamento presenta come principali vantaggi:

• Permette di campionare normalmente più soggetti e più frequentemente. È possibile implementare la raccolta di routine della lingua di tutti i nati morti e dei morti in sala parto.
• Non richiede complicate preparazioni tecniche. Gli stessi operatori di allevamento possono raccogliere questi tipi di campioni.
• Elimina lo stress legato al campionamento negli animali vivi.
• La sensibilità e la specificità della tecnica migliora in alcuni casi in quanto è diretta al campionamento e ad un numero maggiore di animali campionati.
• La qualità del sequenziamento Sanger è generalmente migliore di quella dei fluidi orali.
• Infine, il costo del monitoraggio è inferiore rispetto al tradizionale prelievo di sangue mensile.

Il monitoraggio della PRRS da campioni di carcasse ci consente di ottenere informazioni di importanza epidemiologica in fasi in cui sono stati concentrati meno sforzi per monitorare la presenza di virus PRRS come sono alla nascita, in svezzamento e nell'ingrasso.